MicroSnap菌落總數檢測拭子使用方法

MicroSnap菌落總數檢測拭子組成：

1.         MicroSnap TOTAL增菌拭子，貨號：MS1-TOTAL。

2.         MicroSnap TOTAL檢測拭子，貨號：MS2-TOTAL。

說明與用途：

MicroSnap TOTAL（細菌總數檢測拭子）是一種快速生物發光檢測方法，用于對不同種類樣品中的細菌總數進行檢測和計數，檢測結果可以在7小時內獲得。MicroSnap TOTAL 由一支帶有特定生長培養基的增菌拭子和一支帶有生物發光試劑的檢測拭子所組成，對目標菌所產生的生物標記信號（光子）可通過配套的便攜式EnSURE熒光儀來測定。

檢測需分兩個步驟，首先采用增菌拭子進行短時間的孵育來促進細菌的生長，然后用檢測拭子進行測定。在增菌拭子孵育期間，細菌數量會增加，而潛在的樣品干擾會被降低。細菌生長過程中會產生具有酶活性的生物標記物，細菌數量越多，所產生的生物標記物濃度越高，發出的光也越多。將增菌后的樣品轉送至檢測拭子中，經過拭子的激活、混合步驟后在熒光儀上進行測量。光的輸出量與生物標記物的濃度和所存在細菌的數量呈正比。

MicroSnap TOTAL細菌總數檢測拭子可用于檢測環境表面、各類產品樣品、水以及其它可過濾液體樣本等。

需要但不提供的材料：

l   30±1℃的孵育器

l   EnSURE熒光儀

l   稀釋液，例如：

? 緩沖蛋白胨水（BPW）

? 最大恢復稀釋液（MRD）

? 磷酸鹽緩沖液（Butterfields）

? 用戶選擇的其它驗證過的稀釋液

l   采樣袋

l   攪拌器

    表1：動態范圍（檢測限）：

    若某些樣品的污染超出了表1中所列的范圍，則必須進行以下的梯度稀釋才可在熒光儀上讀數：

l   1%懸液為1000-500,000 CFU

l   0.1%懸液為10,000-5,000,000 CFU

l   注意：當檢測多個梯度稀釋時，必須同時準備和檢測所有的稀釋液以獲得線性結果。

說明：

步驟1：增菌

增菌程序如下描述并可參照圖表的步驟1.

1. 采集樣品并放置于MicroSnap TOTAL增菌拭子中（MS-E-TOTAL）。

       樣品可以是：

i.         表面——涂抹4X4英寸（10X10厘米）的平面，對于不規則表面則盡可能大面積地采集有代表性的樣品。

ii.        液體——1ml液體食物、飲料或水樣可直接加到增菌拭子中。

iii.      產品——1ml合適的懸液，例如將10% W/V（重量/體積）食物勻漿直接添加到增菌拭子中。食物勻漿的準備應按照標準微生物程序執行。對于未知的樣品污染，應準備低于10% 的稀釋液進行檢測。

注意：當進行對比實驗時，兩種方法的樣品分析必須在10分鐘內開始以獲得可比性結果。

2. 將拭子重新插入拭子管中，恢復剛從拭子袋中取出時的樣子。

3. 緊握拭子管并用拇指和食指前后彎曲球閥，折斷頂部的Snap-Valve閥來激活拭子。

4. 輕提球閥（大約1~2英寸）以釋放內壓，然后擠壓球閥將所有培養基釋放到拭子管底部，確保大部分的增菌肉湯集中在拭子管底部。

5. 將拭子重新插入拭子管中并旋緊密封。

6. 輕輕地搖晃管子，將樣品和增菌肉湯充分混合。

7. 在30±1℃溫度下孵育7個小時± 10分鐘。

步驟2：檢測

檢測程序如下描述并可參照圖表的步驟2。在開始步驟2之前，先開啟EnSURE熒光儀。若已經編程了檢測位，可選擇出要檢測的檢測位。

1. 將MicroSnap TOTAL（MS-TOTAL100）檢測拭子從冷藏條件下取出后室溫放置10分鐘。將拭子在手掌上輕拍5次或向下用力地敲打一次，使提取液流到管子底部。

2. 將增菌后的樣品從增菌拭子中轉移到檢測拭子中。增菌拭子可用作移液管，方便使用。

i.         擠壓并釋放增菌拭子的球閥，使樣品吸回到球閥中。

ii.        將增菌拭子從管子中取出。

iii.      通過扭動并抽出球閥將檢測拭子打開，然后放在一邊待用。

    a. 將增菌拭子的拭子頭插入檢測拭子管中（大約1英寸或3厘米），然后輕輕擠壓增菌拭子球閥將增菌樣品慢慢滴入管中直到容量達到檢測拭子管上標記的填充線。避免添加樣品超過填充線，因為這可能增加檢測結果的變量。

iv.      剩余的增菌樣品可以返回到增菌拭子中用于其它檢測。將增菌拭子重新裝配至原始狀態并放置于孵育器中。

    注意：當檢測來自同一增菌樣品的重復樣品時，所有的重復品必須在10分鐘內進行以獲得可比性的結果。

v.       將檢測拭子重新裝配至原始狀態。

3. 緊握拭子管并用拇指和食指前后彎曲球閥，折斷頂部的Snap-Valve閥來激活檢測拭子。擠壓球閥3次以釋放所有的液體到拭子管底部。

4. 輕晃管子使其充分混合。

5. 立即將整個拭子插入熒光儀中，關閉蓋子并保持直立，按下OK鍵開始測量。倒數15秒出結果。

6. 熒光儀顯示屏上為RLU（相對光單位）讀數，在熒光儀上設置符合所要求的CFU限值的RLU臨界值。參照以下“結果判定"對應表換算出CFU數值。

結果判定：

EnSURE熒光儀顯示的結果是相對光單位（RLU）。RLU值與初始接種菌量呈正相關，并可與細菌數量（菌落形成單位，CFU）進行換算。下面表2中給出了RLU值與CFU值的對應關系。